从小镇做题家苟成大医 第35章

　　但凡想要拿到其中一个，都需要足够的积累。

　　当然，但凡能够拿到一个，也能让人功成名就，几百万的课题经费是小菜一碟，数千万的科研基金，也是很常见的。

　　而这样的一个项目启动资金，是袁威宏目前拿下的青年基金的百倍有余。

　　再要说什么的时候，外面做完检查复诊的病人，已经推开门。

　　袁威宏就不再说话，方子业也是赶紧开始薅自己的学识点，一步一步地进行阅片审视，精准诊断并用药，然后得到了0.9的学识点。

　　美滋滋地开心起来。

　　因为即便是中南医院，也不是那种疑难杂症遍地走的，疑难杂症自然不少，可也有简单的病种，病人挂号的时候，可不会考虑浪费资源这样的说法。

　　门诊完，方子业就又得到了15点左右的学识点，这一下，即便是加点打结术到了3级，给老师送礼物。

　　学识点的余额，一下子又累积到了60之多，还可以增加一个3级技能的同时，今天晚上，方子业还有细胞实验，即将收获，到时候观察结果，肯定又是一笔不菲的学识点。

　　“师父，我先放白大褂，然后去实验室了啊！”

　　“好，WB好好跑。”袁威宏交待，仿佛是在给方子业暗示，方子业在做什么，他都了然于心。

　　方子业点了点头，加快了脚步。

　　做实验、搞钱、发文章、学识点，充实且快乐。

　　WB是缩写，蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。

　　一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。方子业研究的HK2，其实就是生物化学糖酵解过程中的第一个限速酶己糖激酶，而HK2则是己糖激酶的缩写，己糖激酶是催化己糖使之磷酸化的酶，它是糖酵解途径的第一个酶，也是糖酵解途径的绝对限速酶。

　　众所周知，糖酵解是糖转化为能量的第一步，没有糖酵解的第一步，葡萄糖和果糖想要被正常利用，是几乎不可能的事情，而如果依靠酮体等旁路作为有氧氧化的底材，肯定无济于事。

　　因此定量检测HK2的含量，在骨巨细胞瘤经过过表达、沉默后的绝对数量，是检测HK2在骨巨细胞瘤发展过程中作用的一个定量证据。

　　Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

　　经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分……

　　原理听起来颇为复杂，但其实真正要操作的时候，主要的步骤主要是以下几步。

　　试剂准备，也就是让蛋白质跑的跑道，需要聚丙烯酰胺凝胶电泳来提供。

　　然后是参赛的运动员，是把肿瘤细胞裂解之后，使得内部的蛋白质充分释放，然后制作了标准曲线。

　　制作标准曲线之后，就可以让自己处理的细胞产生的‘运动员’开始上赛道了。

　　紧接着是电泳、转模、免疫反应、显影等等一系列后，通过特殊的抗体和试剂，就能够显示目标蛋白的胶片。

　　将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值……

　　这个过程很复杂，也相对漫长，更需要耐心。

　　不过，方子业反正已经下了门诊，来到实验室里，就一步一步地按部就班来做。且旁边还有洛听竹帮点小忙。

　　最后呈现出结果后，洛听竹欣喜异常：“方师兄，你今天这个条带显示很清楚欸，上一次范师兄跑出来的是哑铃状的。”

　　说完，她偏头看向方子业的成片，条带清晰、没有杂带、背景干净！

　　“呈哑铃状一般配置胶有问题，另外还有一种可能是样品中含有太多杂质，没有离心下来，然后杂质沉积在孔的中间，蛋白自然被推挤到两边。”

　　“配好胶，不合格的坚决不用，不要铤而走险。”方子业仔细想了一下原理，如此给洛听竹解释。

　　“那如果有条带拖尾呢？”洛听竹想了一下，又问了一个问题，应该是她跟着别人做的时候，看到过这样的情况。

　　“条带拖尾的话，一般是蛋白量浓度高或者，孵一抗浓度和时间太长。”

　　“蛋白含量高的话，可能是前期的文献准备没有确定好，我认为最有可能的是因为一抗浓度太高，作用时间太长引起。”

　　“当然也有其他原因。”方子业再次看了看自己的成片。

　　HK2与β-actin（肌动蛋白）内参两个条带，共有过表达、正常以及沉默三个组。

　　肿瘤细胞实验的内参，特别是涉及糖酵解通路的细胞实验内参，是不能选用常见的GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）的。

　　“你这张图，直接用prism进行作图就可以用了吧？”洛听竹继续问。

　　“应该差不多吧，条带的厚度灰度差距还是蛮明显的。拍个照，拍个照……”方子业赶紧让洛听竹也帮忙拍一张。

　　洛听竹欣然答应，灵动得如同一只勤劳的小松鼠。

　　而方子业此时，看着学识点飞速跳动到了134，一下子增加了足足七十点的学识点，也是知道啊，这一次的WB实验，在这一个课题之中的作用占比不小，可能是支撑整个课题规模的小骨架了。

　　“这张照片拍得怎么样？”洛听竹拍完后，问方子业。

　　方子业泛出姨母笑，而洛听竹则以为自己拍照的水平还不错，于是又咔咔地来了几张。

　　然后就是清理实验台并清洗相应的实验器材了。

　　一切结束，方子业建议：“洛师妹，辛苦了，一起去吃个宵夜吧？”

　　洛听竹这会儿正在左右翻看着WB成图的照片，歪着头点了一下：“好呀。”

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第69章 最热心的人（求收藏，求追读）

　　时间已经接近十一点半，不算早了。

　　且这个点，在中南医院附近是没什么吃东西的了，需要去到汉街的另外一头，才可能有宵夜。

　　但说好既定，两人从实验室出来时，都不必关灯，仍有人在里面辛勤工作，每个人的实验进度，都各自有差异。

　　方子业给洛听竹讲了袁威宏同意暂时让洛听竹来帮忙他做实验的事情，虽然没有太大的贡献和成果，但能够跟着学习，这样的机会就不容错过。

　　洛听竹与方子业二人走出实验室后，洛听竹才问：“方师兄，你现在WB都做完了，你后续还要做什么实验吗？”

　　方子业目前已经进展的实验有迁移、侵袭、CCK-8增殖，周期检测以及WB的HK2定量分析，在基础实验方面的话，只是在HK2这个分子酶分子层面，已经可以告一段落。

　　自然，这只是最前期的实验，与其相关可做的事情还有很多。

　　“目前主要有两个可探索的方向，一个是看能不能找到对HK2有影响的药物，对肿瘤的生长侵袭等产生作用，另外一个是，继续深入寻找HK2的靶点，这是后续课题的一个延展方向。”

　　“再就是动物实验了，我们只打算做皮下载瘤和骨内载瘤两组。”方子业不怕把后续的延展方向告诉给洛听竹。

　　因为啊，即便是洛听竹用这个东西去申请后续课题，但是这个课题的前期实验研究，不是洛听竹做的，所以洛听竹即便依托于邓勇教授，也未必能够争得过方子业和揭翰两人。

　　袁威宏这个组，有前期研究基础，两个人的底蕴都不一样。

　　洛听竹闻言便问：“奥，那应该就是后续可进展的实验和项目了吧？”

　　申请项目的时候，一定要注意可延展性，现在方子业只做到了分子层面，可延展性不要太多。之前袁威宏也是考虑到了这一点，才申请了这个方向。

　　是一个可以后续进展很深入的庞大体系。

　　就是已经证明了HK2在骨巨细胞瘤里面有用，那么一切对HK2有作用的相关因素，都可以参与到骨巨细胞瘤的控制当中来，其他人没有做过，至少是没有证明是通过HK2对骨巨细胞瘤产生的影响的话，所有的东西，都可以做。

　　虽然这样未必能够解决骨巨细胞瘤的化疗药物，但是，每一种肿瘤的化疗药物，都是通过这样的一步一步摸索，千路万径寻找出来的，不可能一蹴而就。

　　“应该是的，车到了洛师妹。”

　　“你坐后座，我坐副驾驶。”方子业说完就要去拉开车门。

　　洛听竹想了一下，就邀请说：“方师兄，伱跟我一起坐后面呗，我还想问方师兄一些问题。”

　　方子业并未拒绝。

　　在车上的时候，洛听竹没有方便问，但是下了车，找了一个烧烤摊，点好单后，洛听竹就问了一下，她打算做的骨肉瘤相关的通路的可行性。

　　洛听竹打算申请的课题通路，是mrna骨肉瘤与PKM相关通路的作用和影响。

　　这样的实验，其实比方子业现在做的HK2与骨巨细胞瘤，更加深入一层，相当于是要在mRNA上进行处理，看它对PKM的影响。

　　这就类似于，你处理别人的父母，观察对别人孩子的影响，通俗理解是这样，当然真实的原理，肯定不是这个道理。

　　方子业就说：“PKM是一条热门通路，你要找一条非常合适的mRNA才行，不然的话，很难让人眼前一亮。”

　　“而且，骨肉瘤，也是目前骨科肿瘤里面，最热门的话题。”

　　“当然，肯定能做，只要你能够找到足够的文献来支撑的话，那么这条通路，也能做下去。”

　　目前，关于肿瘤化疗的研究进展，进入了超级的平台期，已经四十年来，没有再有巨大的突破和建树。

　　全世界所有的研究人员，都在辛勤耕作和试探，万一取得突破，那一夜暴富和一夜成名，压根不愁。

　　只是吧，这个机遇是很难遇到的，相当于是大海捞针。

　　你也做通路，我也做通路，大家都看谁运气好。

　　没有突破性的进展，就只能是积攒基本功，沿着自己的研究路线，深入下去，一层层剥开通路以及通路上下游的奥秘，能够把自己所做的细胞系，所做的通路，做成最集大成者，也是一种学术贡献。

　　别人也会认可你的能力和实力，未必真要直接做出一种非常成熟的抗肿瘤药物。

　　想要一蹴而就，无异于太监唠嗑，无稽之谈。

　　“洛师妹，其实如果你觉得骨肉瘤太过热门的话，选择一种比较偏门一点的肿瘤来申请课题，也是一种不错的选择。”

　　“没必要格外往最热门的通路里面挤。”方子业给洛听竹建议了一条退路。

　　“那倒也是。谢谢你啊师兄，实验室里的人都说，你是最热心肠的。”洛听竹笑了笑，没有答应，也没拒绝。

　　虽然是博士，但是她这样博士，因为积累的时间不够，虽然早毕业，但也早就业，因此还需要进一步增厚自己的底蕴。

　　有足够的成果，才是展现自己科研能力的一种标杆……

　　方子业则没回话，心说，如果我不是做实验的时候，有利可图，我也不会这么大方啊，其实帮忙做点实验，自己还能蹭点试剂，还能够得到学识点，这样的快乐才是根本。

　　夜宵后，方子业把洛听竹送到了学校门口，就告辞了，没有更进一步的往宿舍方向送，到了学校里面，有保安看守着，还是算相对安全的。

　　返到家里之后，方子业就赶紧洗洗睡，看着诱人的，高达三位数的学识点，方子业也一时间不知道该从何加点为好。

　　先留着呗，万一后面有用呢？只要不着急用的话，先攒一攒，加点一个4级技能去，奔着博士出关练功房的标准去对标吧。

　　但想起邓勇教授画的饼，方子业也是稍微有点头疼。

　　创伤外科练功房801，真正的出关标准，就是博士生出关的标准，出关后，就有非常大的留院机会。

　　在袁威宏这一届，就是出关就留院，但现在越来越卷，出关要留院，还得科研有一定能力才行。

　　缝合术的皮冻缝合、切开术的猪肉解剖学分离、清创术的碾压后猪肉成形、肌肉缝合、截骨术、骨折手法复位术，骨缺损的拼接技术、骨成形术、骨瓣设计……

　　邓勇教授嘴里的提前毕业这饼画得？

第70章 守家（求收藏，求追读）

　　随着骨科年会COA的接近，孙绍青师兄的毕业也无限临近，再加上，最近校招、找工作的跟班考核等也接近。

　　方子业这样已经是绝对可以读博的硕士三年级学生，就没有操作机会可言了，基本上，所有临床上的操作机会，都是孙绍青的，就是博士二年级一年级的王元奇等人，都得看着。

　　自然，不管怎么样，十一月中旬如期而至，COA的日期，也是抵达。

　　科室里的人，少了一半多。

　　邓勇教授肯定要去啊，他还是一个分会场的大会主席，有两场报告要作汇报，不能缺席。

　　谢晋元副教授也要去，他是一个分会场的邀请嘉宾，其实就是被大大佬带着玩的中青年骨干。

　　袁威宏也要去，袁威宏目前也是青年骨干，虽然说，在大会场里面，没有一席之地，但是在青年会场，袁威宏还是要展现一下自己的，有一个讲课汇报，是关于骨缺损治疗的。

　　中南医院的创伤外科，骨不连的治疗，是一大特色。

　　再留下的，就只有秦葛罗主治医师守家了。

　　博士师兄里面，孙绍青师兄本来是打算去的，但是正好与浙大附属医院的招聘冲突了，所以现在要去浙省拼一把。

　　王元奇师兄跟着去了，顾毅师兄没去。

　　李源培也是再一次出去搞博士的申请考核了，也是缺席。然后硕士二年级的师弟的话，就是邓勇教授的学生，舒朗留了下来，谢晋元副教授把自己的学生龚子明带了去。

　　一年级的揭翰和朱允炆，则是都去了会场。

　　如此一来，邓勇教授组留下来的，就是秦葛罗、顾毅、洛听竹、方子业、舒朗和兰天罗，一个主治五个小卡拉米。

　　年会一共持续五天，从周三到周日。

　　周三，正好是冲突袁威宏的一个门诊日，使得方子业郁闷足足半天，这可是好几十点学识点啊。

　　不过，虽然是丢失了门诊日的学识点，但是，因为科室里的大佬空缺，导致秦葛罗开始发力。

　　从周二的晚上，秦葛罗就开始寻索一些普通的骨折患者，并且让总住院金宏洲啊，也接诊一些小创伤进到科室里来做。

　　反正床位空着也是空着，就捡着能做的，之前中南医院不要的病人做。